Even (2P-002~2P-048)

[2P-022] cpHalo-tag labeling to quantify O₂-sensitive ion-channel TRPA1 trafficking

*Yutaro Sugihara¹, Kyohei Soga¹, Kento Ojima¹, Yasuo Mori², Shigeki Kiyonaka¹ (1. Graduate school of Engineering, Nagoya University, 2. Graduate school of Engineering, Kyoto University)

Keywords:

Halo-tag,TRPA1,circular permutation,chemical labeling,ion channel

酸素濃度変化を感知して活性化するイオンチャネルTRPA1はガンの低酸素抵抗性との関連が示唆されているが、細胞内動態の詳細は未解明である。我々はTRPA1の動態解析に向けてタンパク機能への摂動を最小限にしたTRPA1のケミカルラベル化法の開発に着手した。TRPA1はN、C末端共に細胞内に存在する。そこで末端にしか融合できなかったHalo-tagを細胞外ループに融合させるためcpHalo-tagを新たに設計し、動態解析に必須な細胞膜表面選択的な蛍光ラベル化を実現した。