Presentation Information
[P138]Study on host range expansion of Gram-positive bacteria infective bacteriophage by shuffling receptor binding protein
*Takumi Kamosaki1, Hiroshi Ono2, Junko Shinozaki2, Masuda Yoshimitsu3, Takahisa Miyamoto3, Ken-ichi Honjoh3 (1. Graduate School of Bioresource and Bioenvironmental Sciences, 2. NISSHIN SEIFUN GROUP INC., 3. Faculty of Agriculture)
Keywords:
bacteriophage,lactic acid bacteria
【目的】バクテリオファージ（以下，ファージ）は細菌感染性のウイルスであり，他の抗菌剤とは異なる作用機序により殺菌効果を示す.また，ファージは高い宿主特異性を持ち，標的細菌の選択的制御を可能にする一方，その特異性は菌株毎で異なり，宿主域が狭くなるという課題もある.ファージの構造タンパク質であるReceptor binding protein (RBP)は，この高い宿主特異性に大きく寄与している．そこで本研究では，宿主域の拡大を目的として，１つのファージ粒子の中に複数種のRBPを組み込んだRBP置換ファージを作製ならびにその評価を行った．
【方法】Leuconostoc mesenteroides NBRC3832株（宿主菌）に異種ファージ由来2種のRBP（RBPLN34またはRBPmix）をそれぞれ発現する形質転換株を構築した.これらのRBP発現宿主菌に乳酸菌ファージvB_LmeS_w1（以下, LmeS）を感染させ，異種RBPをランダムに組み込んだファージ（LmeS-RBPLN34またはLmeS-RBPmix）を作製し，液体培地中での抗菌力を評価した．また，現在，主要なグラム陽性食品汚染菌の一つであるStaphylococcus aureusに対するRBP置換ファージの作製も同様の方法で試みている．
【結果】宿主菌との共培養開始後6時間で，LmeS，LmeS-RBPLN34，LmeS-RBPmixはそれぞれ生菌数を3，4，5 log以上減少させ，RBP置換ファージにおいて–抗菌力の向上が確認された．この結果は，RBP置換ファージの宿主菌に対する吸着能が変化し，一部の耐性菌に対しても感染可能となったことで，宿主菌全体に対する抗菌力の向上に繋がったものと考えられた.一方，非宿主菌のL. mesenteroides 25株に対する抗菌力は改善されず宿主域の拡大は認められなかった．
【方法】Leuconostoc mesenteroides NBRC3832株（宿主菌）に異種ファージ由来2種のRBP（RBPLN34またはRBPmix）をそれぞれ発現する形質転換株を構築した.これらのRBP発現宿主菌に乳酸菌ファージvB_LmeS_w1（以下, LmeS）を感染させ，異種RBPをランダムに組み込んだファージ（LmeS-RBPLN34またはLmeS-RBPmix）を作製し，液体培地中での抗菌力を評価した．また，現在，主要なグラム陽性食品汚染菌の一つであるStaphylococcus aureusに対するRBP置換ファージの作製も同様の方法で試みている．
【結果】宿主菌との共培養開始後6時間で，LmeS，LmeS-RBPLN34，LmeS-RBPmixはそれぞれ生菌数を3，4，5 log以上減少させ，RBP置換ファージにおいて–抗菌力の向上が確認された．この結果は，RBP置換ファージの宿主菌に対する吸着能が変化し，一部の耐性菌に対しても感染可能となったことで，宿主菌全体に対する抗菌力の向上に繋がったものと考えられた.一方，非宿主菌のL. mesenteroides 25株に対する抗菌力は改善されず宿主域の拡大は認められなかった．
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